LINC00926通過增強STUB1介導的泛素-蛋白酶體途徑調節PGK1蛋白的穩定性亞細胞定位結果顯示，LINC00926主要定位于細胞質，FISH實驗進一步證實了這一點(圖4A和4B)。結合LINC00926沒有改變PGK1mRNA水平的事實，我們推測LINC00926在轉錄后水平下調了PGK1的表達。事實上，蛋白酶體抑制劑MG132的加入阻斷了LINC00926過表達介導的PGK1降解，這表明泛素-蛋白酶體途徑參與了LINC00926對PGK1蛋白穩定性的調節(圖4C)。LINC00926過表達增加PGK1泛素化(圖4D)。下調LINC00926基因后，PGK1蛋白水平升高，泛素化水平降低(圖4E)。為了尋找負責LINC00926調控PGK1蛋白穩定性的E3泛素連接酶STUB1，我們接下來通過RNA下拉實驗確定了LINC00926在乳腺*細胞中的蛋白伴侶。質譜分析結果顯示了特異性差異表達譜帶。我們鑒定出了幾個可能與LINC00926相互作用的蛋白，包括兩個E3連接酶，STUB1和E6AP(圖4F)。免疫印跡進一步證實，只有STUB1與LINC00926相互作用，而E6AP則沒有(圖4G)。此外，RIP分析也表明，PGK1和STUB1免疫沉淀中，LINC00926***富集(圖4H)。此外，LINC00926增強了STUB1介導的PGK1泛素化(圖4I)。敲低STUB1**減弱了LINC00926對PGK1泛素化的影響FMT處理可恢復SCI小鼠中糞便短鏈脂肪酸(SCFAs)。江西標書實驗可參觀
7）miR-155負調控SOCS6表達，***NF-κB通路
為了進一步探討外泌體miR-155誘導EndoMT和線粒體功能障礙的潛在機制，我們重點研究了miR-155的下游基因。首先，利用在線miRNA靶標數據庫預測了84個潛在靶基因。SOCS6是具有3’UTR的下游mRNA之一，可能與miR-155結合(圖7A)。結合GSE49329和GSE49330數據庫，我們發現miR-155的表達與SOCS6的表達呈負相關(圖7B)。為了進一步證實SOCS63’UTR是miR-155的直接靶標，我們根據預測的結合位點(圖7C)構建了SOCS63’UTR野生型(WT)和突變型(MUT)序列。熒光素酶報告實驗顯示，與對照組相比，共轉染SOCS6的WT-3’UTR時，miR-155過表達明顯降低了熒光素酶活性(圖7D)。qRT-PCR和westernblot進一步顯示，miR-155過表達導致SOCS6表達降低，而miR-155敲低上調SOCS6mRNA和蛋白水平(圖7E和F)。GO分析顯示miR-155可以負向調控細胞-細胞粘附，參與調控成纖維細胞增殖(圖7G)。從GO分析可知，miR-155可能介導NF-κB信號通路(圖7G)。過表達miR-155可***提高細胞質和細胞核中p65蛋白的水平，而敲低miR-155可起到相反的作用(圖7H)。 湖北標書動物模型構建注射circSDHC敲低*細胞的小鼠比對照組表現出更少的惡病質.
外泌體circ_0072083與膠質瘤患者的TMZ耐藥、診斷和生存有關
為了分析外泌體 circ_0072083 在膠質瘤患者中的價值，從患者的血清樣本中分離外泌體。通過 TEM 和特定標記物（CD63、CD81 和 TSG101）驗證外泌體。此外，大小主要在100-200 nm，并且在耐藥患者中其濃度更高。此外，與TMZ敏感患者（n ?=33）相比，TMZ耐藥患者（n =36）的外泌體circ_0072083水平顯著上調。此外，通過將這些外泌體暴露于不同條件來評估外泌體 circ_0072083 的穩定性，結果表明 TMZ 耐藥患者中外泌體 circ_0072083 的豐度不受不同孵育時間和不同 pH 值的顯著影響。此外，外泌體 circ_0072083 可以作為神經膠質瘤的**診斷靶標（AUC= 0.85，P ?< 0.05），并且外泌體 circ_0072083 水平高的患者總生存率較低（P ?< 0.05）。?根據平均水平將患者分為高（n ?= 36）或低（n = 33）外泌體circ_0072083組。桌子表格11總結出高外泌體circ_0072083水平與膠質瘤患者的**大小、晚期WHO分級、MGMT甲基化和TMZ抗性相關。這些發現表明外泌體circ_0072083在神經膠質瘤患者中具有重要作用。這表明外泌體circ_0072083可以通過在Warburg效應下調節ALKBH5介導的去甲基化來調節miR-1252-5p/NANOG軸來增加膠質瘤中的TMZ抗性。
miR-144在鼻咽*組織和細胞中上調
先前的文獻強調了miR-144在NPC發展過程中的促*作用。我們首先確定miR-144在NPC中的表達模式。采用qRT-PCR方法分析95例鼻咽*活檢標本和95例慢性鼻咽炎鼻咽活檢標本中miR-144的表達。結果表明，miR-144在鼻咽*組織中的表達水平高于在非*性鼻咽組織中的表達水平(圖1A)，并通過原位雜交(ISH)進一步驗證(圖1B)。如圖1C所示，相對于非*性鼻咽組織，鼻咽*組織中CD31的免疫組化染色增強。在鼻咽*組織中，CD31的表達與miR-144的表達呈正相關(圖1D)。隨后，我們通過qRT-PCR比較了人鼻咽*細胞系(C666-1和SUNE1)和鼻咽上皮細胞系NP69之間miR-144的表達水平。與預期的一樣，C666-1和SUNE1細胞表現出相對于NP69更高水平的miR-144表達(圖1E)。以上結果提示，miR144在鼻咽*組織和細胞中呈高表達，與CD31表達呈正相關，表明miR144與**血管生成具有潛在的相關性。 FMT處理可能促進了創傷性脊髓損傷后神經元的存活和軸突再生。
2）M1-BMDMs來源的外泌體加重了bEnd.3細胞的EndoMT
我們評估了M1-BMDMs對bEnd.3細胞的影響。結果表明，M1-BMDMs條件培養基(M1-CM)***降低了bEnd.3細胞TEER值(圖2A)，并增加通透性(圖2B)。此外，TJs蛋白熒光染色顯示，M1-CM處理***降低了bEnd.3細胞膜ZO-1和Occludin的表達(圖2C和D)。為了進一步研究M1-BMDMs是否通過外泌體破壞血管內皮細胞的TJs，我們使用外泌體分泌抑制劑GW4869預處理M1-BMDMs。我們發現，加入GW4869部分逆轉了M1-CM誘導的TEER值的下降(圖2A)，滲透率增加(圖2B)；GW4869也逆轉了TJs蛋白熒光強度下降的趨勢(圖2C和D)。相應的，TJs蛋白表達水平也出現了類似的結果(圖2E)。有趣的是，通過對脊髓切片中的α-SMA和CD31進行共染色，我們發現損傷部位的共定位比未損傷部位更多(圖2F和G)。M1-CM***改變bEnd.3細胞形態，分枝減少，胞體拉長(圖2H)。此外，M1-CM暴露***降低了CD31的表達，并強烈增強了EndoMT標記物膠原I、III和α-SMA在bEnd.3細胞中的表達(圖2I)。然而，GW4869可以部分扭轉這些影響。綜上所述，外泌體可能介導巨噬細胞和血管內皮細胞之間的相互作用，并可能是巨噬細胞誘導血管內皮細胞EndoMT的原因。 SCI小鼠的握力在損傷后逐漸持續恢復。海南標書分子生物學實驗
短鏈脂肪酸與運動恢復/腸屏障通透性的相關性。江西標書實驗可參觀
Il4ra缺陷小鼠的M2樣巨噬細胞減少和再生失調
為了探索再生過程中胰腺巨噬細胞的調節機制，我們進行了基因集富集分析(GSEA)以比較第3天和第1天巨噬細胞的轉錄組譜。巨噬細胞的M2***和IL4刺激特征從第3天開始富含巨噬細胞。我們發現，表達IL-4和IL-13分別提高在第1天，和表達Il4ra自第1天升高，達到峰值在第3天。為了進一步確定受體和配體的細胞來源，在AP損傷后***從胰腺中分離并比較了CD45.2+和CD45.2-細胞，有趣的是，Il4ra1被顯性免疫細胞上表達（CD45.2+），而IL4和IL13中主要表達于實質細胞（CD45.2-）。此外，通過使用Il4ra缺陷小鼠，我們證明了IL4Rα信號在AP損傷后胰腺修復/再生過程中介導了M2巨噬細胞的極化。值得注意的是，與它們的對應物相比，來自Il4ra-/-小鼠的胰腺在第3天和第5天具有更多的ADM結構。總的來說，這些發現表明IL4/IL4Rα軸是AP恢復過程中胰腺巨噬細胞M2極化所必需的，發揮***功能來控制ADM形成的程度。 江西標書實驗可參觀
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
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4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗