操作流程:.待測基因序列片段或位點甲基化引物設計(300p以內)。"利用甲基化轉移酶修飾的DNA和非甲基化修飾的DNA制備標準品(0%，1%,59%，109%,20%,50%。100%梯度HRM標準曲線)●亞硫酸氫鹽處理樣品DNA.上機檢測●數據處理,形成報告(包括實驗過程、試劑耗材、熒光PCR儀原始文件、測序文件等)。實驗實例:對2個病例的某基因20個CG位點進行檢測。分析出不同的甲基化程度。操作流程:●DNA亞硫酸鹽處理用焦磷酸測序專門弓|物設計軟件設計甲基化引物進行PCR擴增預實驗及正式實驗●PCR產物.上焦磷酸測序儀檢測深度測序保證了抽樣隨機性,可靠性和重復性高,與實時定量PCR結果具有較高的一致性。內分泌測序動物模型構建
piRNA是一類長度為26~31nt單鏈的小RNA,大部分集中在29~30nt。piRNA的表達具有組織特異性,只存在于具有全能性的動物細胞,如生殖細胞、**細胞和干細胞等。piRNA通過與Piwi亞家族蛋白結合形成piRNA復合物(piRC)來發揮生物學功能(沉默轉錄基因過程,維持生殖系和干細胞功能,調節翻譯和mRNA的穩定性)。此外，piRNA在一些痘癥細胞中存在異常表達的現象,提示piRNA可能參與**的發生,并可作為**診斷和***中的潛在生物標記物。PiRNA的沉默機制主要利用(1)通過轉錄自與轉座元件(TE)加工而成piRNA,并結合互補結合TE抑制其轉錄;(2)通過編碼蛋白基因區轉錄加工成piRNA,與AGO3,AUB蛋白形成復合體抑制靶基因:(3)由基因3'UTR轉錄生成piRNA，并結合與PIW1,抑制靶基因:(4)從piRNA簇生成piRNA,并與AUB等蛋白相互作用起到抑制靶基因的目的。(5)另外,piRNA也被報道有起到高甲基化調控的協同調控行為。piRNA的生成加工過程途徑(BiogenesisPathway)主要分為二大類:(a)轉錄自TE轉錄元件或piRNA簇的反義鏈經過加工,加載到蛋白AUB或PIWI上形成功能piRNA。通常piRNA介導的piRISC復合體起到引發第二種生成加工途徑的激發作用。(b)通過AUB和AGO3蛋白的剪接體翠功能發生piRNA擴增效應。寧夏測序細胞實驗依托強大的生物信息分析平臺，鑒定已知小RNA,并預測新的小RNA及其靶標基因。
二、甲基化特異性的PCR實驗流程(methylation-specificPCR,MSP)原理:甲基化特異性的PCR是-種靈敏度高且操作相對簡單的甲基化研究方法。重亞硫酸鹽處理DNA后,基因組DNA發生的由甲基化狀態決定的序列改變。隨后進行引物特異性的PCR。該方法弓|物設計是關鍵。MSP中設計兩對引物，即一對結合處理后的甲基化DNA鏈(引物對M),另一對結合處理后的非甲基化DNA鏈(引物對U)。檢測MSP擴增產物，如果用引物M能擴增出片段,則說明檢測位點存在甲基化;若用弓|物U擴增出片段,則說明被檢測的位點不存在甲基化(圖3)。該方法優點是:1.檢測靈敏度高,樣品消耗少，*需1μg的基因組DNA,可用于石蠟包埋樣本;2.快速、簡單，省時:3.如果結合Real-time定量PCR技術(Taqman探針)則能對樣品中檢測位點的甲基化水平進行定量檢測(Metylight)。
轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和,主要包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組研究是基因功能及結構研究的基礎和出發點,通過新一代高通量測序,能夠***快速地獲得某一物種特定組織或***在某一狀態下的幾乎所有轉錄本序列信息,已曠泛應用于基礎研究、臨床診斷和藥物研發等領域。技術優勢。任意物種的全轉錄組分析:無需預先設計特異性探針,因此無需了解物種基因或基因組信息,能夠直接對任何物種進行*****的轉錄組分析。全基因組重測序已經成為動植物育種、群體進化、藥物研發、疾病研究和臨床診斷中迅速而有效的方法之一。
三案例分析1.通過RNA測序分析帕金森病中白血球的長鏈非編碼RNA及選擇性剪接的調控背景:人類壽命的延長伴隨著神經退行性疾病的發病幾率的增加,因而價格不貴的血液診斷的發展迫在眉睫。通過RNA-seq分析血液細胞的轉錄本是發現新的生物標志物的非常高效的途徑。目的:利Ilumina測序平臺對帕金森病人白血球中IncRNAs進行分析,探討其對mRNA選擇性剪接的調控機制。結果:通過對帕金森病人的RNA-seq結果分析發現,在白血球中有6000個以上IncRNAS,其中13個IncRNAS較對照組表達變化***,例如U1剪接體IncRNA,RP11-462G22.1等。同時,在帕金森病人的大腦中表達7000多種IncRNAS,其中有3495種與白血球是共表達的。該研究為帕金森及其他神經退行性疾病的轉錄調控的研究提供了新的思路。利用序列捕獲技術將全基因組外顯子區域DNA捕捉并富集后進行高通量測序的基因組分析方法。河南測序中標率高
人全外顯子組測序技術已逐步應用到單基因致病基因和復雜疾病易感基因研究中。內分泌測序動物模型構建
三、SNP檢測及在基因組的分布在全基因組一致性序列的基礎上,從中提取全基因組中所有的潛在多態性位點,再根據質量值、深度、重復性等因素做進一步的過濾篩選,**終得到高可信度的SNP數據集。根據已有的基因集對檢測到得變異進行注釋。四、InDel檢測及在基因組的分布使用測序個體的短序列與參考基因組進行Paired-End比對,將比對結果進行聚類分析,并結合Paired-End關系檢測可信的shortInDel.在檢測過程中,gap的長度為1~3個堿基。對于每個InDel的檢測，至少需要3個雙末端序列的支持。五、結構變異檢測及在基因組中的分布利用測序個體序列與參考基因組序列進行比對,檢測全基因組水平的結構變異,目前能夠檢測到得結構變異類型主要有缺失插入、復制、倒位、易位等,并根據已有的基因集對檢測到得變異進行注釋。內分泌測序動物模型構建
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經典通路研究，設計的課題均具有后續實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請：提供標書課題設計、撰寫，標書部分基礎實驗的開展，設計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關研究
4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗