四川科研細胞實驗

來源: 發布時間:2021-10-18

為了確定s-flow和d-flow在體內單細胞分辨率下對ECs基因轉錄表達和染色質可及性譜的全基因組影響,我們使用小鼠PCL模型進行了scRNA-seq和scATAC-seq。將C57BL/6小鼠部分結扎,以暴露于血流的對側RCA作為對照,在LCA中誘導d-血流。部分結扎后2天(2D)和2周(2W), rca (2D- r和2W- r)和lca (2D- l和2W- l)用膠原酶酶解獲得單個細胞和單個核,分別用于scRNA-seq和scATAC-seq。

在標準化之后,一個基于無監督圖的聚類將細胞劃分成組,通過統前列形近似和投影(UMAP)圖可視化(圖1A)。我們的UMAP分析確定了16個獨特的細胞簇以流和時間依賴的方式分布(圖1A和1B)。每個細胞簇都是用確定的標記基因進行鑒定(1C).發現8個EC簇(E1E8)、血管平滑肌細胞(SMCs)、成纖維細胞(Fibro)、4個單核/巨噬細胞(macrophages14)、樹突狀細胞(DCs)和T細胞。通過Pecam1、Icam2、Cdh5和Tie1的表達來鑒定EC簇。smc特異性標記為Cnn1、Myl9和Speg。同樣,Medag、Dpep1和Lum作為纖維的標記物;巨噬細胞C1qa,C1qb,C1qc,C5ar1;DCs的Ccr7和Mmp25;T細胞的Itk(圖1C)。


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另外,相對于對照組,在生理條件下,單獨使用siFth不能顯著增加ROS的產生。對鐵死亡的抗性與抑制BODIRY-C11氧化有關。與上述ROS結果一致。測量了鐵死亡的幾種推定生物標志物,包括xCT,Cox2和4HNE表達。如預期的那樣,與對照組+刮擦損傷組相比,在siFth轉染的HT-22細胞中,刮擦損傷的xCT表達顯著下降,而Cox-2和4HNE的表達顯著增加。重要的是,與未經***的siFth組相比,用褪黑素處理siFth轉染的HT-22細胞在刮傷后未能顯著改變xCT,Cox2和4HNE的表達。另外,在生理條件下,單獨的siFth與對照組之間上述蛋白質的表達沒有顯著差異。這些結果表明,用siFth轉染的HT-22細胞易受機械性刮擦損傷誘導的脂質過氧化和鐵死亡的影響,而褪黑素在統計學上并未減輕損傷后的鐵死亡,并且siFth不會影響褪黑素受體的表達。服務科研推薦咨詢細菌可能是導致小鼠腸道尿酸降低的主要原因。

人類肺痙甲基化PCR芯片用于研究文獻已報道在各種各樣的肺臟**中經常發生甲基化的22個**抑制基因的啟動子甲基化狀態。利用這些芯片分析細胞或新鮮組織基因組DNA樣本有助于關聯CpG島甲基化狀態與生物表型。結果還可以洞察肺*發育和進程,及其病理背后的分子機制和生物學通路。利用這個芯片,通過簡單的限制性內切酶消化和實時定量PCR,就可以研究分析22個不同肝*基因的啟動子甲基化狀態。公司特色是以各式高通量二代測序為基礎,利用生物數據信息分析手段,通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺,提供課題整體設計外包,以及撰寫SCI論文一站式服務。

確實,MMTVneu**的caspase-3陽性細胞比相應的Pten+/+少;綜上所述,這些結果表明,PTEN不能被ATM磷酸化的細胞對基因毒性應激誘導的細胞凋亡具有抗性。為了評估表達PTEN-398A且DNA損傷未解決的細胞在輻照(圖2B, C和補充圖4B, C)后的持續存在是否是誘導凋亡反應失敗的結果,我們在IR之前先用泛caspase抑制劑z-VAD-FMK (zVAD)對細胞進行預處理。與DMSO處理相比,zVAD增加了PTEN-WT細胞中未解決的DNA損傷灶的數量,其水平與DMSO處理的PTEN-398A細胞相當(補充圖5F)。然而,需要注意的是,zVAD預處理也略微增加了IR后PTEN-398A細胞中未解決的DNA損傷灶的數量。上海英拜生物有經驗豐富的科研團隊。

環狀RNA(circRNA)是動植物中一類豐富且保守的RNA。**近的研究表明,circRNA可以通過充當非編碼RNA或編碼RNA發揮多種生物學作用。體外合成的circRNA可以不依賴于帽的方式進行翻譯。但鑒定circRNA編碼的蛋白質是困難的,主要是因為circRNA序列及其宿主基因的同源線性mRNA具有較大的重疊。近期NucleicAcidsResearch雜志在線發表了題名為:TransCirc:aninteractivedatabasefortranslatablecircularRNAsbasedonmulti-omicsevidence的文章,該文章主要講述了circRNA翻譯預測和分析的數據庫——TransCirc。發現乳酸菌上清液降低了尿酸濃度。甘肅科研免費設計

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染色質可及性是驅動腎元發育的動態過程,而腎元祖細胞具有不同的染色質可及性譜,且隨其分化而變化。染色質可及性在促進或抑制腎臟修復和再生中的作用對于設計急性和慢性腎臟疾病的治療方案具有重要意義,并可能有助于改善腎臟類***的定向分化。scRNA-seq和snATAC-seq在成年小鼠腎臟中的聯合分析為理解染色質可及性如何調節轉錄提供了一個框架。然而,人類腎臟的單細胞表觀基因組還沒有被描述。

生物信息學工具可以從snATAC-seq數據集中提取出scRNA-seq無法獲取的***信息。預測細胞類型特異性順式調控DNA相互作用和轉錄因子活性是補充scRNA-seq獲得的轉錄信息的兩種方法。長程染色質-染色質相互作用在轉錄調控中起著重要作用,并受到轉錄因子結合的影響。染色質可及性分析將有助于識別通過遠程相互作用影響轉錄的遠程調控區域。 四川科研細胞實驗

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6.表觀遺傳實驗:DNA甲基化實驗(BSP,MSP,焦磷酸測序),RNA甲基化實驗

7.實時定量PCR(mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA),WB,RNA功能驗證實驗(靶基因驗證,過表達,干擾),基因突變及SNP檢測,FISH,RNA-PULLdown,rip,chip實驗以及細胞增殖,凋亡,流式等細胞功能學實驗

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