為了進一步研究MAO-A是否作為巨噬細胞自主因子直接調控TAM極化從而影響抗**免疫，進行了巨噬細胞過繼轉移**實驗。從Maoa WT和KO小鼠中獲取BM細胞，然后培養(yǎng)成骨髓源性巨噬細胞(bone marrow macrophages, BMDMs)。然后將這些Maoa WT或KO BMDMs與B16-OVA黑色素瘤細胞混合，皮下注射到BoyJ WT受體小鼠中建立實體**（圖2g）。在本實驗中，MAO-A缺乏的比較***于TAM細胞。在接受Maoa KO BMDMs小鼠中觀察到**生長抑制（圖2h-i），TAM免疫抑制markers下調（圖2j），免疫刺激markers上調（圖2k-l），以及增強**浸潤CD8+T細胞***（圖2m）。綜上所述，這些體內研究表明MAO-A作為一種直接調節(jié)TAM極化的自主因子，從而影響T細胞抗**反應性和影響**生長。
接下來，在低氧條件下，在HCCLM3和Hep3B細胞中敲低CFL1的表達（圖5A）。結果表明，CFL1敲除***逆轉了缺氧誘導的HCCLM3細胞增殖、細胞遷移和侵襲以及EMT（圖5A-D）。綜上所述，這些結果表明CFL1表達受HIF-1α的轉錄調控，介導缺氧誘導的HCC進展。
6、CFL1通過抑制泛素介導的PLD1降解來維持PLD1的表達為了進一步探索CFL1在HCC中致*作用的下游機制，利用KEGG數(shù)據(jù)庫篩選了受CFL1影響的通路。其中CFL1的高表達與細胞膜中細胞粘附分子和蛋白的定位密切相關（圖6A）。然后，基于蛋白質相互作用數(shù)據(jù)庫預測了CFL1和PLD1之間的潛在相互作用（圖6B）。CFL1敲低降低了HCCLM3細胞中PLD1的蛋白水平，而CFL1過表達增強了Hep3B細胞中PLD1蛋白表達（圖6C）。co-IP實驗表明，CFL1與PLD1相互作用，敲低CFL1可促進肝*細胞中PLD1的泛素化(圖6D-E)。用放線菌酮(CHX，2μg/mL)阻斷肝*細胞蛋白質合成。繪制蛋白降解曲線，表明CFL1敲低時PLD1蛋白降解更快（圖6F）。此外，蛋白酶體抑制劑MG132(25μM)處理可阻斷CFL1敲低誘導的HCC細胞中PLD1降解（圖6F）。因此，這些結果表明CFL1抑制肝*細胞中泛素介導的PLD1蛋白水解。 轉運RNA 課題產(chǎn)學研合作表達PTEN- 398A的細胞中上調的基因與G1/S檢查點的***有關。
結果1）AKI伴有明顯的脂質積累，并與腎損傷的嚴重程度高度正相關
根據(jù)脂質代謝組學分析結果，我們發(fā)現(xiàn)AKI組織中各類甘油三酯(TGs)含量***增加(圖1A)。考慮到AKI中的脂質積累，我們進行實驗來確定其臨床意義。我們對不同嚴重程度的AKI動物標本進行油紅O染色。結果顯示，隨著疾病進展的延長，小鼠腎組織脂質沉積逐漸增加(圖1B)。在體外也發(fā)現(xiàn)了類似的結果，即隨著細胞損傷的嚴重程度，脂質積累的程度增加(圖1C)。這些結果說明AKI中的脂質積累與疾病的嚴重程度呈正相關。
VDR***STZ誘導的糖尿病小鼠AMPK.
為了進一步證實VD-VDR對高糖環(huán)境下AMPK***的影響，我們檢測了STZ誘導的糖尿病小鼠AMPK-ULK1的磷酸化水平。如圖8所示，STZ誘導的糖尿病小鼠PRKAA1和ULK1磷酸化水平降低，KO+STZ小鼠的這種變化更明顯。此外，paricalcitol或VDR過表達促進PRKAA1和ULK1磷酸化，盡管WT+STZ組和OE+STZ組之間沒有統(tǒng)計學差異。我們還通過免疫熒光染色檢測了p-PRKAA1的水平，其變化趨勢與蛋白印跡相似。結合圖3E的結果，我們推測在STZ誘導的糖尿病腎臟中，VDR需要VD***才能有效磷酸化PRKAA1，然后調節(jié)自噬。綜上所述，VD-VDR通過***AMPK-ULK1通路恢復了stz誘導的糖尿病小鼠腎臟缺陷的自噬。 可以上傳原始的fast文件。
二、阻斷atm依賴的PTEN磷酸化導致基因組
了確定ATM介導的PTEN磷酸化如何調節(jié)DDR，構建Pten398A/398A和Pten+/+littermatesMEFs細胞模型。PTEN蛋白水平不受398A突變的影響(補充圖3A,B)。此外，磷酸化AKT(PI3K通路活性的標記物)水平在Pten398A/398A和PTEN+/+MEFs中相似(補充圖3B)。構建人乳腺上皮細胞系(MCF10A)，穩(wěn)定表達野生型PTEN(PTEN-wt)，或PTEN的突變形式，不能被ATM磷酸化(PTEN-398a)。在這些細胞中，內源性的PTEN基因被CRISPR/Cas9編輯刪除，創(chuàng)建了PTEN空細胞，然后用野生型或突變型的蛋白質穩(wěn)定轉導重組。在表達PTEN-wt和PTEN-398a的MCF10A細胞中，PTEN蛋白和磷酸化AKT水平相似(補充圖3A)，使這些細胞成為ATM磷酸化PTEN分子作用研究的合適替代模型。Pten+/+和Pten398A/398Amef在10gyIR作用下，通過測定每個細胞的γH2AX和53bp1病灶數(shù)量來評估其修復DNA損傷的能力。在Pten+/+mef中，我們觀察到在照射后4小時，每個細胞的病灶數(shù)量達到峰值，24小時后恢復到接近基線水平(圖2AC)。Pten+/+和Pten398A/398A在ir后4小時，每個細胞聚集的病灶數(shù)量相似。然而，Pten398A/398Amef在24小時時間點比Pten+/+mef保留了更多的病灶數(shù)，表明DNA修復能力降低(圖2C)。 產(chǎn)生關于環(huán)境影響疾病的病因和分子機制的可測試的假設。非酒精性脂肪性肝炎課題分子生物學
我們接下來研究了Pex對HSCs生物學行為的影響。凋亡課題課題設計
鑒于以上結果，作者想進一步探究tiRNA-Gly與RBM17作用的分子結果。結果顯示，tiRNA-Gly可提高總RBM17蛋白的水平，但是不影響RBM17的mRNA水平（圖3H-I）。隨后，用蛋白質合成抑制劑環(huán)己胺(CHX)處理細胞，tiRNA-Gly轉染后增加了K1細胞內源性RBM17蛋白的半衰期，而β-actin作為對照（圖3J）。此外，蛋白酶體抑制劑MG132處理后，內源性RBM17在轉染tiRNA-Gly的K1細胞中的積累量**高于轉染siRNA-NC的K1細胞，表明tiRNA-Gly抑制了蛋白酶體依賴性的PTC細胞中RBM17的降解（圖3K）。此外，tiRNA-Gly的過表達***抑制了泛素化RBM17的水平（圖3L）。綜上所述，tiRNA-Gly可以穩(wěn)定RBM17蛋白通過泛素/蛋白酶體依賴性降解。凋亡課題課題設計
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
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4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗